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步骤 | 实验内容 | 实验时间 | 备注 |
---|---|---|---|
1 | 重组质粒构建 | 2 周 | 可选择不同载体,不同标签His, Trx , GST, SUMO… |
2 | 重组表达测试 | 1周 | 不同表达菌株可选 |
3 | 可溶性表达测试 | 1-2周 | 不同诱导剂,诱导温度,也可重新考虑基于蛋白质 结构点突变或者缺失突变的突变体构建 |
4 | 小规模蛋白表达和纯化 | 1-2周 | 若为包涵体表达,时间和方法将有所调整 |
5 | 大规模蛋白表达和纯化 | 根据表达体积商定 | 可选择摇瓶或者发酵罐培养 |
您可根据实验需求选择上述任一实验内容,或相关实验内容的组合;
纯化时选用亲和纯化、离子柱纯化、疏水填料纯化和分子筛纯化; 蛋白本身特性,表达系统的选择会影响最终蛋白的纯度和活性。